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    酶免疫試驗的優(yōu)點及局限性

    發(fā)布時間: 2018-12-29  點擊次數(shù): 1761次

        酶免疫試驗之所以能成為臨床免疫檢驗中的主導(dǎo)技術(shù),是與它的方法上的特異性和靈敏性、操作上的簡便性以及試劑的穩(wěn)定性分不開的,還有很重要的一點是,其對環(huán)境沒有污染威脅。

       盡管如此,作為一項免疫檢驗技術(shù),酶免疫試驗還是有其局限性的,不但所檢測的生物學(xué)體液樣本如血清中有可能存在各種干擾實驗的因素,而且在實驗過程中,影響結(jié)果的因素也很多,尤其是進(jìn)行手工的ELISA測定時。

       此外,在定性ELISA測定中,陽性判定值(CUT-OFF)的建立,是在一定的統(tǒng)計學(xué)基礎(chǔ)上的,相對于某個具體的受檢者來說,其有可能并不具備正確性。例如,使用ELISA方法檢測抗HCV及抗HIV或HBsAg,有時候,檢測所得的陽性結(jié)也許并不是真正的陽性,而需要使用其他方法如重組免疫印跡(recombinantimmunoblotas—say,RIBA)、蛋白印跡(Westernbl。t,WB)或中和試驗來確認(rèn),才能報告陽性。這里抗HCV和抗HIV的檢測均使用病毒部分的基因工程抗原,其他一些病毒如流感病毒、腮腺炎病毒和水痘病毒等感染人體后,亦或一些自身抗體,也有可能會導(dǎo)致假陽性反應(yīng)。

       HBsAg的測定主要是弱陽性的問題,這與ELISA測定的“灰區(qū)”有關(guān)系,處于cut-off值周圍亦即“灰區(qū)”的結(jié)果的可靠性通常較差,陽性當(dāng)然需要確認(rèn),陰性卻也未必是真,這一點在血站篩檢獻(xiàn)血員血液時是非常重要的,必須引起注意,并采取適當(dāng)?shù)拇胧?,防止此類?yán)重影響人們健康的傳染性疾病經(jīng)輸血傳播,本書后面的有關(guān)章還會對此問題做詳細(xì)論述。此外,免疫測定的基礎(chǔ)是抗原抗體的特異反應(yīng),因此,如檢測抗原,除了要求抗體(單抗或多抗)是特異的外,還要求待測抗原上必須存在有能與所用抗體結(jié)合的抗原決定簇,如果因為基因突變導(dǎo)致某些位點的不表達(dá),或者結(jié)合位點因為某些原因被封閉或阻斷,都會影響抗體與抗原的結(jié)合,造成假陰性結(jié)果。

       如檢測抗體,則要求所用包被抗原應(yīng)盡可能包含所有的特異抗原決定簇,同時又盡可能不含有非特異的成分,這一點往往由于技術(shù)水平的限制而難以*做到,因此,從某種意義上來說,假陽性假陰性是不能*避免的,盡管通過努力,可以將其降至很低的程度。這也是建立臨床免疫檢驗方法所努力的方向。

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